新冠病毒肺炎流式标本处理注意事项

新冠病毒肺炎流式标本处理注意事项

前言：国家卫健委批准，1月25日发布的《北京协和医院关于“新型冠状病毒感染的肺炎”诊疗建议方案（V2.0)》**条“2019-nCoV病人的诊疗-诊断标准中提到：对于急性发热对于急性发热（72h内，体温大于37.5度）且肺部影像学正常者，若外周血**细胞***小于0.8×109/L，或出现CD4及CD8 T细胞计数明显下降者，即使核酸检测未呈现阳性，均应居家隔离密切观察。病人常规检查中提到：1、筛查病例，就诊当日可酌情查炎症因子（IL-6,IL-10,TNF-α）、TB亚群11项.2、确诊病人序贯检查，第5-7天若有条件可复查TB**细胞亚群11项。

可以从诊疗指南中看到，**功能越来越受重视，尤其是临床**的过程中**功能状态的改变。仅仅做**细胞亚群还不够，活化以及T细胞功能评价的指标也必不可少。

正是因为**受到临床的重视，许多新冠病人的定点医院都开展了流式的检测。而我们的流式工作的老师，除了结果的准确及解读以外，也需要关注生物**的防护。

整理了流式样本处理过程中一些注意事项，献给我们的流式工作者们。

01样本加样
建议在生物**柜进行实验操作，如有液体溅出，用浸湿75%酒精的纱布覆盖后擦拭。个人按照3级生物**进行防护。

02溶血及固定
根据卫生部2011年发布的《流式细胞术检测外周血**细胞亚群指南》，尽量使用含固定剂的溶血素（如贝克曼库尔特的流式细胞分析用溶血剂PN: A11895，或可延长溶血时间至30min，加等量pbs混匀后上机），可以达到灭活病毒的作用。
如采用贝克曼库尔特自动溶血仪器，可配套使用Beckman Coulter Immunoprep（PN: 7546946），程序运行结束后放置30min，可以达到灭活病毒的作用。
如使用其他不带固定剂成分的溶血素（如氯化铵，或者贝克曼库尔特 Versalyse等, PN: A09777），也可以配制0.1%-2.0%的多聚甲醛或甲醛，或者稀释好的细胞保存液（PN：A07800）在溶血时一起加入，并且放置30min，可以达到灭活病毒的作用。

03混匀、离心等步骤防护
灭活前的样品处理步骤，须严格按照三级防护，谨防气溶胶污染，例如：

使用带生物**密封盖或密封杯的离心机进行离心（如Beckman Coulter高速冷冻离心机配套的 AeroSolve透明密封杯系列，359232），样品管/流式管*好带密封盖离心，不使用自动脱帽离心功能；

即使室温离心，也选用密封更良好的制冷型离心机（如Beckman Coulter Avanti J-15R，PN: B99515），并置于负压抽风区域；

离心后静置10-30分钟再开盖，仔细观察样品无泄漏后，再把透明密封杯移至生物**柜再开盖取样。

04仪器的清洗及维护
如有样本的洒溢，请用浸湿75%酒精的纱布覆盖30min后擦拭，包括样本进样针。
流式细胞仪的废液桶中需要装有占其体积 1/10的0.71mol/L次氯酸钠 (未稀 释的家用漂白剂)。 实验室设备应该用具有灭活传染源作用的溶液或新配制的 10%家用漂白剂** ,尤其在设备维修和保养前给予严格**。

流式工作者们请在确认防护**的情况下进行实验，贝克曼库尔特的技术应用专家们时刻准备着做好支持工作，共克时艰！

涉及的产品信息及注册证号：
PN: A11895 流式细胞分析用溶血剂，备案号：国械备20170672号
PN: 7546946血细胞分析用溶血剂，备案号：国械备20170373号
PN: A07800 细胞保存液，备案号：国械备20140286
PN: B99515 高速冷冻离心机；备案号：国械备20171151号
PN: A09777. 血细胞分析用溶血剂国械备20140189号

参考资料：
1. 《北京协和医院关于“新型冠状病毒感染的肺炎”诊疗建议方案（V2.0)》
2. 2019新型冠状病毒相关实验室检测的生物**指南（试行**版）--中华医学会检验分会
http://www.cslm.，org.cn/cn/news.asp?id=73.html&from=gr，oupmessage&isappinstalled=0
3. 流式细胞术检测外周血**细胞亚群指南--2011版卫生部行业标准（下载文件）

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